Los clones de células osteocíticas MLO-Y4 expresan distintos patrones de expresión genética característicos de diferentes etapas de diferenciación de osteocitos

Resumen

Los osteocitos son las células óseas más abundantes y se forman cuando los osteoblastos se incrustan en la matriz ósea. A través de cambios en la expresión genética y efectos paracrinos, los osteocitos regulan la cantidad de osteoblastos, células formadoras de hueso, y osteoclastos, células que reabsorben el hueso, que son necesarios para mantener la masa ósea. MLO-Y4 es la línea celular osteocítica mejor caracterizada; sin embargo, carece de expresión de esclerostina, producto del gen SOST, que es fundamental para la función de los osteocitos y bloquea la formación de hueso. Con el objetivo de aislar clones de MLO-Y4 con diferentes perfiles de expresión génica, realizamos cultivos a muy baja densidad de células MLO-Y4 transfectadas de forma estable con proteína fluorescente verde nuclear (MLOnGFP). La morfología celular se visualizó bajo un microscopio de fluorescencia. Una vez que las células alcanzaron el 80% de confluencia, se extrajo el ARN y se realizó una PCR cuantitativa en tiempo real.
Los clones exhiben diferentes tamaños y morfología, con algunas células mostrando una forma fusiforme
y otras con abundantes proyecciones y forma de estrella. La expresión genética también difirió
entre los clones. Sin embargo, ninguno de los clones examinados expresó SOST. Concluimos que
los clones MLO-nGFP constituyen una herramienta útil para estudiar la diferenciación de osteocitos y el papel
de los osteocitos en el control de la formación y resorción ósea in vitro.